ABSTRACT
RESUMEN: El intervalo postmortem (IPM) equivale al tiempo que ha transcurrido desde que un ser humano ha muerto hasta su examinación postmortem. Después de la muerte, el cuerpo experimenta modificaciones en su composición física y química denominados cambios postmortem expresados por signos que pueden ser analizados para el cálculo del IPM. El objetivo del estudio fue describir los cambios histológicos presentes en la musculatura estriada lingual de rata en diferentes IPM. Se utilizaron 10 ratas machos Sprague dawley de dos meses de edad. Los animales fueron eutanasiados y dejados a temperatura ambiente (4 - 14 ?C) para tomar muestras de la lengua a distintos IPM (0, 6, 12, 24, 48, 72, 96 y 120 horas postmortem). El estudio se llevó a cabo considerando las recomendaciones de la Guía para el Cuidado y Uso de Animales de Laboratorio. Las muestras fueron fijadas en formaldehido tamponado a 10 % y procesadas para su inclusión en paraplast. Se realizaron cortes de 5 μm de grosor y fueron teñidas con HE para su análisis con microscopía óptica. Los cambios histológicos en las células musculares estriadas de la lengua estaban asociados a los distintos IPM. A las 6 horas postmortem, hubo cambios iniciales en la morfología nuclear y su pigmentación. A las 12 y 24 horas postmortem, se observaron cambios en las estrías musculares y aumento en el número de casos con alteraciones nucleares. A las 48 y 72 horas postmortem, eran evidentes las vacuolas citoplasmáticas, cambios en la coloración de las miofibras y aumento en las alteraciones nucleares. A las 92 y 120 horas postmortem, se observó disminución de las estrías musculares y núcleos celulares. Los núcleos eran picnóticos y puntiformes; hubo pérdida de la morfología celular y presencia de musculo liso. En conclusión, los cambios de la histología del músculo estriado lingual de rata permiten estimar el IPM. Este modelo podría ser aplicable a la medicina forense.
SUMMARY: The postmortem interval (PMI) equals the time that has elapsed since a human being has died until his postmortem examination. After death, the body experiences modifications in its physical and chemical composition know as postmortem changes expressed by signs that can be analyzed for the calculation of the MPI. The aim of the study was to describe the histological changes present in rat lingual striated musculature in different PMIs. 10 two-month-old male Sprague dawley rats were used. The animals were euthanized and left at room temperature (4-14 ?C) to sample the tongue at different PMIs (0, 6, 12, 24, 48, 72, 96 and 120 hours postmortem). The study was carried out considering the recommendations of the Guide for the Care and Use of Laboratory Animals. The samples were fixed in 10% buffered formaldehyde and processed for inclusion in paraplast. 5 μm thick sections were made and stained with HE for análisis with light microscopy. Histological changes in the striated muscle cells of the tongue were associated with the different PMIs. At 6 hours postmortem, there were initial changes in nuclear morphology and its pigmentation. At 12 and 24 hours postmortem, changes in muscle striae and an increase in the number of cases with nuclear alterations were observed. At 48 and 72 hours postmortem, cytoplasmic vacuoles, changes in myofiber coloration, and increased nuclear alterations were evident. At 92 and 120 hours postmortem, a decrease in muscle striae and cell nuclei was observed. The nuclei were pyknotic and pinpoint; there was loss of cell morphology and presence of smooth muscle. In conclusion, changes in the histology of rat lingual skeletal muscle make it possible to estimate MPI. This model could be applicable to forensic medicine.
Subject(s)
Animals , Rats , Postmortem Changes , Tongue/anatomy & histology , Muscle, Skeletal/anatomy & histology , Time Factors , Rats, Sprague-Dawley , Forensic MedicineABSTRACT
RESUMEN: El intervalo Postmortem (IPM) es un importante desafío por resolver en la patología forense, y consiste en poder determinar el tiempo transcurrido desde la muerte hasta el momento de la autopsia. Dada la poca confiabilidad de algunos métodos por la gran influencia de factores externos y propios del cadáver, la bioquímica forense ha recibido considerable atención por sus niveles de seguridad. La ciudad de Quito se ubica en la cordillera de Los Andes a 2850 msnm, sin embargo, en la literatura no existen reportes de medición de estos parámetros a una altura como ésta. El objetivo fue establecer una correlación entre sodio (Na+), cloro (Cl-) y potasio (K+) del humor vítreo del cuerpo vítreo y el IPM a la altura de la ciudad de Quito. Para el estudio se utilizaron 128 muestras de cuerpo vítreo provenientes de 16 autopsias practicadas en la Unidad de Medicina Legal Zona 9, en IPM de 6, 12, 24, 48, 72, 96, 120 y 144 horas. Para la obtención del humor vítreo se siguió el método convencional, se dividió para las 8 alícuotas y se llevó a congelación -20 °C hasta el momento de su análisis. La cuantificación de la concentración de electrolitos Na+, Cl- y Potasio+ se realizó mediante analizador ISE de Roche Cobas (Roche Diagnostics) C501, calibrado para uroanálisis, y no fue necesaria la dilución. Durante la calibración y cada tres muestras, se midió un estándar interno para corregir los efectos de la desviación sistemática en la calibración. El enfoque estadístico se basó en un análisis de correlación lineal, utilizando el coeficiente de correlación de Spearman. La correlación entre las horas postmortem y las concentraciones de los diferentes electrolitos, fueron estadísticamente significativas. Se pudo corroborar una correlación lineal significativa entre el IPM y el aumento del K+ en el HV.
SUMMARY: The postmortem interval (PMI) is an important challenge to be solved in forensic pathology, and it consists of being able to determine the time elapsed from death to the moment of autopsy. Given the unreliability of some methods due to the great influence of external factors and those specific to the corpse, forensic biochemistry has received considerable attention for its levels of safety. The city of Quito is located in the Andes mountain range at 2850 meters above sea level, however, in the literature there are no reports of measurement of these parameters at a height like this. The objective was to establish a correlation between sodium (Na+), chlorine (Cl-) and potassium (K+) of the vitreous humor and the MPI at a height of 2,850 masl. For the study, 128 samples of vitreous humor were used from 16 autopsies performed in the Zone 9 Legal Medicine Unit, in IPM of 6, 12, 24, 48, 72, 96, 120 and 144 hours. To obtain the vitreous humor, the conventional method was followed, it was divided for the 8 aliquots and it was frozen at -20 ° C until the moment of its analysis. The quantification of the concentration of electrolytes Na+, Cl- and K+ was carried out using an ISE analyzer from Roche Cobas (Roche Diagnostics) C501, calibrated for urinalysis, and no dilution was necessary. During calibration and every third sample, an internal standard was measured to correct for the effects of systematic deviation on the calibration. The statistical approach was based on a linear correlation analysis, using the Spearman correlation coefficient. The correlation between the postmortem hours and the concentrations of the different electrolytes were statistically significant. A significant linear correlation between the PMI and the increase in K+ in vitreous humor could be corroborated.
Subject(s)
Humans , Postmortem Changes , Potassium/analysis , Sodium/analysis , Vitreous Body/chemistry , Chlorine/analysis , Time Factors , Longitudinal Studies , Electrolytes/analysisABSTRACT
El intervalo postmortem (IPM) es un importante desafío a resolver en patología forense, y consiste en poder determinar el tiempo transcurrido desde la muerte hasta el momento de la autopsia. Dada la poca confiablidad de algunos métodos por la gran influencia de factores externos, la Histoquímica (HQ) y la Inmunohistoquímica (IHQ), entre otros, han recibido considerable atención por sus niveles de objetividad en la investigación forense. Se presenta una revisión con búsqueda sistemática de estudios experimentales que apliquen métodos HQs e IHQs para la estimación del IPM sobre material cadavérico humano. Se identificaron 1053 artículos de los cuales 12 cumplieron con los criterios, a los que se agregaron 4 mediante una búsqueda manual (n=16 artículos). Alemania fue el país con más publicaciones destacando con 8 artículos. Las técnicas HQs de AgNORs, TRAP y PAS fueron utilizadas en 5 estudios (glándulas sudoríparas, piel, hígado, médula ósea y mucosa labial), mientras que las IHQs fueron empleadas con diferentes grupos antigénicos en 12 estudios (páncreas, cerebro, pulmón, tiroides, hígado, glándulas pituitarias, glándulas sudoríparas y mucosa gingival). Las estimaciones del IPM fueron posibles con márgenes entre 2-3 h. hasta los 20 días dependiendo de la técnica. El análisis de tejidos provenientes de cavidad oral asegura una vía no invasiva, de fácil acceso y bajo resguardo natural a la influencia de factores ambientales. Si bien no existe un método único que permita de manera confiable estas estimaciones, la introducción de nuevas técnicas permitiría evitar la producción de errores.
The postmortem interval (IPM) is an important challenge to be solved in forensic pathology, and it consists in determine the time elapsed since death until the autopsy. Given the low reliability of some methods due to the great influence of external factors, Histochemistry (HQ) and Immunohistochemistry (IHQ), among others, have received considerable attention for their levels of objectivity in forensic investigation. A scoping review of experimental studies that apply HQs and IHQs methods to estimate the MPI on human cadaveric material is presented. We identified 1053 articles, of which 12 met the criteria; we added 4 articles through a manual search (n = 16 articles). Germany was the most productive country, with 8 articles. HQ techniques of AgNORs, TRAP and PAS were used in 5 studies (on sweat glands, skin, liver, bone marrow and labial mucosa), while IHQs techniques were used with different antigenic groups in 12 studies (on pancreas, brain, lung, thyroid, liver, pituitary glands, sweat glands and gingival mucosa). IPM estimates were possible with margins between 2-3 hours up to 20 days depending on the technique. The analysis of oral tissues ensures a non-invasive route, easily accessible and under natural protection to the influence of environmental factors. Although there is no single method that reliably allows these estimates, the introduction of new techniques would prevent the production of errors.
Subject(s)
Humans , Postmortem Changes , Autopsy/methods , Immunohistochemistry/methods , Time Factors , Cadaver , Forensic MedicineABSTRACT
La entomología forense es una disciplina que utiliza insectos para obtener información útil en la determinación del intervalo postmortem (IPM). Las moscas de la familia Calliphoridae son muy utilizadas en entomología forense, sin embargo, su identificación a nivel de especie puede dificultarse cuando el individuo se encuentra incompleto o en estadio inmaduro. En el presente trabajo, se evaluó el potencial de la región ITS2 del genoma nuclear para la identificación de especies de Calliphoridae en Colombia utilizando tres aproximaciones: comparando distancias genéticas utilizando la metodología de códigos de barra, haciendo una reconstrucción filogenética, y con enzimas de restricción (PCR-RFLPs). Se secuenciaron un total de 520 pb en 44 individuos pertenecientes a 16 especies. Se calcularon los valores de distancia intraespecífica e interespecíficas utilizando el modelo K2P. Los valores de distancia intraespecífica oscilaron entre 0 y 0,252 %, mientras que las distancias interespecíficas fluctuaron entre 3,6 y 18,9 %, evidenciándose que esta técnica puede ser utilizada como código de barras genético en la identificación de especies de la familia Calliphoridae. Tanto en los análisis de Neighbour-Joining como en los análisis bayesianos el 90 % de los géneros presentan una monofilia sustentada en probabilidad posterior de 0,89 a 1. En todos los casos la especie Blepharicnema splendens agrupa con el género Lucilia. Con base en las secuencias obtenidas se utilizó la aplicación NEBCutter para identificar cuatro enzimas de restricción las cuales se probaron en el laboratorio y se comprobó su utilidad para la identificación rápida de especies de Calliphoridae en Colombia.
Forensic entomology is a discipline that uses insects to obtain useful information for the determination of the postmortem interval (PMI). Flies of the family Calliphoridae are extensively used for this purpose, however, the identification of these flies can be difficult when the individual is not an adult or when it is incomplete. In the present work, we tested the utility of the ITS2 region of the nuclear genome for the identification of Calliphoridae species in Colombia using three approaches: comparing genetic distances using the barcoding methodology, with a phylogenetic reconstruction, and with PCR-RFLPs. We sequenced 520 bp in 44 individuals belonging to 16 species of califorids. Intraspecific and interspecific distance values were calculated using the K2P model. The intraspecific distance values ranged between 0 and 0.252 %, while the interspecific distance values ranged between 3.6 and 18.9 %, indicating that this gene can be used as a genetic barcode for the identification of species of the Calliphoridae family. Both the Neighbour-Joining and Bayesian analyses recovered 90 % of the genera as monophyletic, with pp values between 0.89 and 1. Blepharicnema splendens was always recovered within the Lucilia genera. Based on the obtained sequences we used the NEBCutter application to identify four restriction enzymes that cut in a differential way and generated useful patterns for the identification of the species. The enzymes were successfully tested and confirmed the utility of this technique as a fast way to identify species of Calliphoridae in Colombia.
